شناسایی و کلونینگ اپرون سولفورزدایی sox (dsza, b) در باکتری بومی رودوکوکوس fmf

سابقه و هدف: باکتری بومی رودوکوکوس fmf از میان چندین سویه که از خاک مناطق مختلف ایران جدا شده بود، انتخاب گردید. مطالعات اولیه نشان داد که این باکتری دارای توانایی مصرف دی بنزوتیوفن به عنوان منبع گوگرد می باشد. از آن جا که فعالیت حذف گوگرد طی یک مسیر حفظ شده صورت می پذیرد، طرح حاضر با هدف شناسایی، کلونینگ و تعیین توالی نوکلئوتیدی ژن های گوگردزدا در این باکتری طراحی و اجرا شد. مواد و روش ها: در این تحقیق ابتدا اپرون گوگردزدایی از داخل باکتری رودوکوکوس اریتروپولیس igts8 جداسازی شد و به عنوان پروب در شناسایی ژن های مسیر سولفورزدایی 4s با استفاده از تکنیک سادرن بلاتینگ به کار رفت. بعد از تأیید حضور اپرون گوگردزدایی در باکتری بومی رودوکوکوس fmf، پرایمرهای مناسب طراحی شد؛ سپس ژن های dsza,b با استفاده از تکنیک pcr تکثیر گردید و بعد از خالص سازی برای کلونینگ به داخل وکتور ptz57r مورد استفاده قرار گرفت. یافته ها: کانستراکت حاصل از کلونینگ ژن های dsza,b به داخل وکتور ptz57r به نام ptzab57r خوانده شد و با استفاده از برش های آنزیمی تأیید گردید، سپس توالی ژن های dsza,b بعد از خالص سازی پلاسمید به روش large scale به طریقه اتوماتیک و توسط شرکت mwg dna biotech آلمان تعیین گردید. نتیجه گیری: مقایسه سکانس به دست آمده از ژن های dsza,bدر باکتری بومی رودوکوکوس fmf هم سانی کامل آن را با سکانس ژن های dsza,b در باکتری رودوکوکوس اریتروپولیس igts8 نشان می دهد که دلالت بر حفظ شدن مسیر گوگردزدایی در این باکتری دارد.